Show simple item record

Investigation of specific salivary protein biomarker for OSCC patient to develop as a screening test from saliva using lateral flow immunochromatography

dc.contributor.authorแจ่มใส เพียรทองth_TH
dc.contributor.authorChamsai Pientongen_EN
dc.contributor.authorทิพยา เอกลักษณานันท์th_TH
dc.contributor.authorTipaya Ekalaksanananen_EN
dc.contributor.authorจุรีรัตน์ ดาดวงth_TH
dc.contributor.authorJureerut Daduangen_EN
dc.contributor.authorพลธรรม ไชยฤทธิ์th_TH
dc.contributor.authorPonlatham Chaiyariten_EN
dc.contributor.authorภัทรวุฒิ วัฒนศัพท์th_TH
dc.contributor.authorPatravoot Vatanasapten_EN
dc.date.accessioned2019-03-12T07:05:58Z
dc.date.available2019-03-12T07:05:58Z
dc.date.issued2019
dc.identifier.otherhs2474
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11228/5026
dc.description.abstractผู้ป่วยโรคมะเร็งช่องปากมักได้รับการวินิจฉัยเมื่ออยู่ในระยะรุนแรงของโรค (advanced stage) ซึ่งส่งผลให้ผู้ป่วยเหล่านี้มีการพยากรณ์ของโรคไม่ดี (poor prognosis) ทำให้มีอัตราการเสียชีวิตสูง ดังนั้น จึงจำเป็นอย่างเร่งด่วนที่จะต้องมีการพัฒนาวิธีการตรวจโรคมะเร็งช่องปากในระยะเริ่มแรกของการเกิดโรคและวิธีการตรวจคัดกรองโรคจากกลุ่มประชากรที่มีความเสี่ยง เช่น กลุ่มที่มีการสูบบุหรี่ ดื่มสุราและการเคี้ยวหมาก รวมทั้งการติดเชื้อ human papillomavirus (HPV) และ Epstein-Barr virus (EBV) ที่มีความถูกต้อง แม่นยำ รวดเร็วและง่ายต่อการใช้จากผลการทดลองก่อนหน้านี้ ด้วยวิธี two-dimensional gel electrophoresis (2-DE gel) ทางผู้วิจัยพบว่า peroxiredoxin 2 (PRDX2) และ zinc-alpha-2-glycoprotein (ZAG หรือ AZGP1) มีระดับการแสดงออกในตัวอย่างน้ำลายที่มาจากกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งช่องปากสูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ในการศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจหาการแสดงออกของโปรตีน PRDX2 และ ZAG ในกลุ่มตัวอย่างน้ำลายที่ได้มาจากกลุ่มควบคุม ผู้ป่วยที่มีการอักเสบในช่องปากและผู้ป่วยที่มีรอยโรคระยะก่อนมะเร็ง (precancerous) รวมทั้งกลุ่มมะเร็งช่องปาก เพื่อยืนยันการเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ (biomarker) ของโปรตีนดังกล่าว และทางผู้วิจัยยังศึกษาบทบาทของ PRDX2 และ ZAG ในเซลล์เพาะเลี้ยงมะเร็งช่องปากที่ยังไม่เคยมีการรายงานมาก่อน ตัวอย่างน้ำลายที่ได้มาจากกลุ่มควบคุม กลุ่มผู้ป่วยที่มีการอักเสบในช่องปาก กลุ่มผู้ป่วยที่มีรอยโรคระยะก่อนมะเร็งและกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งช่องปาก ได้ถูกรวบรวมเพื่อใช้ในการตรวจหาระดับการแสดงออกของโปรตีน PRDX2 และ ZAG ด้วยวิธีเวสเทิร์นบลอท (western blot) และวิเคราะห์หาความไว ความจำเพาะและค่าพื้นที่ใต้เส้นโค้ง (area under the curve, AUC) สำหรับการศึกษาหน้าที่ของ PRDX2 และ ZAG เซลล์ ORL-48T ได้ถูกติดเชื้อด้วยรีโทรไวรัส (retrovirus) ที่บรรจุพลาสมิด pCLXSN-PRDX2 และ pCLXSN-ZAG จากนั้นนำเซลล์ที่ผ่านการคัดเลือกโคลนด้วยยาจีนีติซินหรือจี 418 (geneticin หรือ G-418) จากนั้นนำโคลนที่ได้ไปวิเคราะห์การวัดการเพิ่มจำนวนของเซลล์ (cell proliferation) วัฏจักรของเซลล์ (cell-cycle progression) การตายแบบอะพอพโทซิส (apoptosis) และการเคลื่อนที่ของเซลล์ (cell migration) ด้วยวิธีเอ็มทีที (MTT assay) โฟลวไซโทเมตรีที่ย้อมเซลล์ด้วยสาร propidium iodide โฟลวไซโทเมตรีที่ย้อมเซลล์ด้วยสาร annexin V และ propidium iodideapoptosis และการสมานแผล ตามลำดับ ผลการทดลองพบว่า ปริมาณ PRDX2 ในตัวอย่างน้ำลายที่ได้มาจากกลุ่มผู้ป่วยที่มีรอยโรคระยะก่อนมะเร็งและมะเร็งช่องปากมีค่าอัตราการแสดงออกสัมพัทธ์ (relative expression) แตกต่างจากกลุ่มควบคุมและกลุ่มช่องปากอักเสบอย่างมีนัยสำคัญ ขณะที่ปริมาณ ZAG ในน้ำลายเฉพาะในกลุ่มมะเร็งช่องปากมีค่า relative expression แตกต่างจากกลุ่มควบคุมและกลุ่มช่องปากอักเสบอย่างมีนัยสำคัญ ผลการวิเคราะห์จากในตัวอย่างระยะก่อนเป็นมะเร็งและในกลุ่มมะเร็งช่องปาก มีค่า AUC ของ PRDX2 เท่ากับ 0.8661 และ 0.9521 ในขณะที่การแสดงออกของ ZAG มีค่า AUC เท่ากับ 0.8832 และ 0.8494 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมตามลำดับ แต่เมื่อเปรียบเทียบกับน้ำลายของกลุ่มช่องปากอักเสบ จะมีค่า AUC ของ PRDX2 เท่ากับ 0.8512 และ 0.8543 ตามลำดับ ซึ่งสามารถจำแนกได้ดีกว่าการตรวจหาระดับการแสดงออกของ ZAG ที่มีค่า AUC เท่ากับ 0.7752 และ 0.7848 ตามลำดับ จากผลการทดลองนี้ แสดงให้เห็นว่า เฉพาะ PRDX2 สามารถใช้จำแนกโรคระยะก่อนเป็นมะเร็งและมะเร็งช่องปากออกจากกลุ่มควบคุมและกลุ่มช่องปากอักเสบได้ นอกจากนี้ ผู้วิจัยพบว่าการใช้ระดับการแสดงออกร่วมกัน (combination) ของ PRDX2 และ ZAG จะทำให้การจำแนกกลุ่มระยะก่อนเป็นมะเร็งและมะเร็งช่องปากออกจากกลุ่มอักเสบได้ดีขึ้น โดยให้ค่า AUC เท่ากับ 0.8002 และ 0.8570 ตามลำดับ สำหรับการศึกษาหน้าที่ของ PRDX2 ในเซลล์เพาะเลี้ยงมะเร็งช่องปาก ORL-48T พบว่า เซลล์ ORL-48T ที่ถูกติดเชื้อด้วยเชื้อไวรัส retrovirus ที่บรรจุพลาสมิด pCLXSN-PRDX2 มีสัดส่วนของการเกิด cell proliferation, cell-cycle progression และ cell migration สูงกว่าเซลล์ ORL-48T ที่ถูกติดเชื้อด้วยไวรัส retrovirus ที่บรรจุพลาสมิด pCLXSN (เซลล์ control) แต่ลดจำนวน apoptotic cells อย่างมีนัยสำคัญ สำหรับการศึกษาหน้าที่ของ ZAG ในเซลล์เพาะเลี้ยงมะเร็งช่องปาก ORL-48T พบว่า เซลล์ ORL-48T ที่ถูกติดเชื้อด้วยไวรัส retrovirus ที่บรรจุพลาสมิด pCLXSN-ZAG มีสัดส่วนของการเกิด cell-cycle progression และ cell migration ไม่แตกต่างจากเซลล์ ORL-48T ที่ถูกติดเชื้อด้วยไวรัส retrovirus ที่บรรจุพลาสมิด pCLXSN (เซลล์ control) แต่ลดสัดส่วนของ cell proliferation และเพิ่ม apoptotic cells โดยเฉพาะอะพอพโทซิสระยะท้าย (late apoptosis) อย่างมีนัยสำคัญ ผลการทดลองเหล่านี้ แสดงให้เห็นว่า PRDX2 ทำหน้าที่ในการส่งเสริมการพัฒนาของมะเร็งช่องปาก ในขณะที่ ZAG มีบทบาทในการกระตุ้น late apoptosis ในเซลล์มะเร็งช่องปากและการแสดงออก PRDX2 สามารถใช้เป็น biomarker เพื่อจำแนกโรคระยะก่อนเป็นมะเร็งและมะเร็งช่องปากออกจากกลุ่มควบคุมและกลุ่มอักเสบในช่องปากได้ ขณะที่การแสดงออกร่วมกันของ PRDX2 และ ZAG ในน้ำลาย สามารถใช้เป็น biomarker เพื่อเพิ่มความไวในการจำแนกโรคระยะก่อนเป็นมะเร็งและมะเร็งช่องปากออกจากกลุ่มอักเสบในช่องปากและการศึกษานี้จะนำไปต่อยอดเพื่อพัฒนาวิธีการตรวจคัดกรองโรคมะเร็งต่อไปth_TH
dc.description.sponsorshipสถาบันวิจัยระบบสาธารณสุขth_TH
dc.language.isothth_TH
dc.publisherสถาบันวิจัยระบบสาธารณสุขth_TH
dc.rightsสถาบันวิจัยระบบสาธารณสุขth_TH
dc.subjectมะเร็งช่องปากth_TH
dc.subjectMouth--Cancerth_TH
dc.subjectปาก--มะเร็งth_TH
dc.subjectการบริการสุขภาพ (Health Service Delivery)th_TH
dc.titleการหาตัวบ่งชี้ที่จำเพาะต่อผู้ป่วยมะเร็งช่องปากเพื่อพัฒนาเป็นชุดตรวจคัดกรองจากน้ำลายด้วยวิธี lateral flow Immunochromatographyth_TH
dc.title.alternativeInvestigation of specific salivary protein biomarker for OSCC patient to develop as a screening test from saliva using lateral flow immunochromatographyen_EN
dc.typeTechnical Reportth_TH
dc.description.abstractalternativeOral squamous cell carcinoma (OSCC) is often diagnosed with late stage resulting in poor prognosis. Therefore, early detection and screening methods of OSCC that has the accuracy, precision, rapidity and simplicity are urgently developed for screening of people who exposure with risk factors including smoking, alcohol consumption and betel quid chewing as well as human papillomavirus (HPV) and Epstein-Barr virus (EBV) infection and have precancerous lesion. From our preliminary result, peroxiredoxin 2 (PRDX2) and zinc-alpha-2-glycoprotein (ZAG or AZGP1) were significantly upregulated in salivary OSCC different from cancer-free control using two-dimensional gel electrophoresis (2-D) Gel which was the step of validation test. Therefore, this study aimed to examine the expression of PRDX2 and ZAG proteins in saliva from healthy control, oral inflammation, precancerous and OSCC groups which was the step of confirmation test. In addition, we also investigated the function of PRDX2 and ZAG in OSCC cell line that has not been reported yet. The saliva samples from healthy volunteers, patient with any inflammatory lesions in oral cavity, precancerous lesions with leukoplakia or lichen planus and OSCC were analyzed for the expression of PRDX2 and ZAG proteins using western blot. The function of PRDX2 and ZAG were in vitro studied by transduction to OSCC cell line (ORL-48T) with retrovirus containing pCLXSN-PRDX2 and pCLXSN-ZAG, respectively. These transduced cells were selected by the G418-containing medium and analyzed for cell proliferation, cell-cycle progression, apoptosis and cell migration using MTT, PI staining for flow cytometry, apoptosis kit for flow cytometry and wound healing assay, respectively. The results showed that the relative expression of PRDX2 protein in salivary precancerous and OSCC was significant difference from healthy volunteers and patient with any inflammatory lesions in oral cavity, whereas only the relative expression of ZAG protein in saliva of OSCC significant difference from healthy volunteers and patient with any inflammatory lesions in oral cavity. The result showed that AUC of PRDX2 in salivary precancerous and OSCC was 0.8661 and 0.9521 whereas AUC of ZAG was 0.8832 and 0.8494 respectively when compared to healthy control. In addition, AUC of PRDX2 in salivary precancerous and OSCC had higher value (0.8512 and 0.8543, respectively) than ZAG (0.7752 and 0.7848, respectively) when compared to the patient with any inflammatory lesions in oral cavity. This result demonstrated that only PRDX2 can be a biomarker for screening of precancerous and OSCC from healthy control and the patient with any inflammatory lesions in oral cavity. The AUC of the combination of PRDX2 and ZAG in precancerous and OSCC was 0.8677 and 0.9009 respectively compared to healthy control and 0.8002 and 0.8570 respectively compared to the patient with any inflammatory lesions in oral cavity. The combination of PRDX2 and ZAG can increase the sensitivity to discriminate the precancerous and OSCC from the patient with any inflammatory lesions in oral cavity. For in vitro study, the proportion of cell proliferation, cell-cycle progression and cell migration in PRDX2-overexpression ORL-48T cells were significantly higher than pCLXSN-transduced ORL-48T cells. Inversely, cell proliferation and migration in ZAG-overexpression ORL-48T cells were not different from pCLXSN-transduced ORL-48T cells.These results demonstrate that PRDX2 functions as a tumor promoter whereas ZAG plays role on induction of late apoptosis in ORL-48T cells. The expression of PRDX2 in saliva can be biomarker to screen of precancerous and OSCC and the combination of PRDX2 and ZAG can increase the sensitivity to discriminate the precancerous and OSCC from the patient with any inflammatory lesions in oral cavity. These proteins will be further used for development of OSCC screening method.en_EN
dc.identifier.callnoWU280 จ846ก 2562
dc.identifier.contactno60-066
dc.subject.keywordชุดตรวจคัดกรองจากน้ำลายth_TH
.custom.citationแจ่มใส เพียรทอง, Chamsai Pientong, ทิพยา เอกลักษณานันท์, Tipaya Ekalaksananan, จุรีรัตน์ ดาดวง, Jureerut Daduang, พลธรรม ไชยฤทธิ์, Ponlatham Chaiyarit, ภัทรวุฒิ วัฒนศัพท์ and Patravoot Vatanasapt. "การหาตัวบ่งชี้ที่จำเพาะต่อผู้ป่วยมะเร็งช่องปากเพื่อพัฒนาเป็นชุดตรวจคัดกรองจากน้ำลายด้วยวิธี lateral flow Immunochromatography." 2019. <a href="http://hdl.handle.net/11228/5026">http://hdl.handle.net/11228/5026</a>.
.custom.total_download17

Fulltext
Icon
Name: hs2474.pdf
Size: 4.377Mb
Format: PDF
 

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record